approfondimenti
Lavori con l'RNA? Fallo a regola d'arte!
10' tempo di lettura
Come lavorare con l'RNA?
🧪Consumabili
✔️ Utilizzare
provette
in polipropilene, monouso, sterili e
puntali sterili, esenti da RNasi.
✔️ Per quanto possibile, mantenere le provette chiuse durante la preparazione.
✔️ Prima dell'uso, la vetreria dovrebbe essere trattata in
stufa
per almeno 2 ore a 250 °C.
🧤Ambiente di lavoro
✔️ Indossare
guanti
durante la preparazione di RNA e cambiarli frequentemente in modo da creare un ambiente di lavoro il più
possibile esente da RNasi.
✔️ Evitare di operare in prossimità di eventuali altre analisi che impieghino RNasi.
✔️ Se usi RNasi per altre analisi, cambia il
camice
prima di iniziare la preparazione di RNA.
✔️ L'ideale sarebbe dedicare una
specifica postazione
alla preparazione esclusiva di RNA.
✔️ Minimizza le comunicazioni durante la preparazione o utilizza una
mascherina
per prevenire che goccioline di saliva contenenti RNAsi interferiscano con il tuo campione.
🧬Protezione del campione
✔️ Dove possibile, usare campioni freschi. In alternativa, è possibile proteggere i campioni di RNA dalla
degradazione nei modi seguenti:
📌
Congelamento in azoto liquido;
📌Stoccaggio in
ultracongelatori a -80 °C;
📌Utilizzo di reagenti stabilizzanti come
NucleoProtect® RNA
;
📌Evita lo scongelamento dei campioni prima del contatto con il buffer di lisi!
📑Preparazione del campione
✔️ Mantieni
l'attrezzatura fredda
e esegui la preparazione del campione in azoto liquido. Se hai difficoltà, controlla i protocolli
Macherey Nagel per i kit RNA: contengono istruzioni specifiche per la corretta preparazione dei tuoi
campioni.
🌡️Stoccaggio
✔️ Conserva sempre l'RNA eluito in ghiaccio per garantire una stabilità ottimale. Conservalo a
-20°C per brevi
periodi e a -80°C per lungo termine.
✔️ Se devi accedere all'RNA isolato frequentemente,
aliquotalo
in piccoli volumi in modo da evitare successivi cicli di congelamento-decongelamento che riducono
l'integrità dell'RNA.
✔️ Quando scongeli i tuoi campioni, fallo sempre in
ghiaccio
per evitare la degradazione dell'RNA.
La tua sfida, la nostra soluzione
| Sangue | Batteri e lieviti | |||||
Sfida ✔️Anticoagulanti (tipicamente EDTA) che possono inibire le analisi successive. |
Soluzione ✔️Lavaggio con 2 diversi tamponi per la rimozione di sali, metaboliti e macromolecole cellulari. |
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Sfida ✔️Distruzione della struttura fisica della cellula. |
Soluzione
✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo B (biglie in vetro) (non incluse) |
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| Plasma e fluidi biologici | Piante e funghi | |||||
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Sfida ✔️Purificazione di small RNAs. |
Soluzione
✔️Speciale chimica del tampone che permette la purificazione di small RNAs (>18 nt). |
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Sfida
✔️Inibitori come amido, zucchero, |
Soluzione
✔️2 differenti tamponi per rimuovere le impurità e i metaboliti; |
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| Virus | Insetti | |||||
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Sfida
✔️Bassa concentrazione di virus; |
Soluzione
✔️RNA carrier che aumentano il la capacità legante e il recupero; |
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Sfida ✔️Struttura fisica e biochimica dei gusci in chitina. |
Soluzione
✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo G |
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| Cellule e tessuti | Terreno | |||||
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Sfida
✔️Omogeneiz |
Soluzione
✔️Facile omogeneiz |
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Sfida ✔️Inibitori come polisaccaridi, urati e lipidi; |
Soluzione
✔️La combinazione dell'omogeneiz |
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| FFPE-tessuti | Feci | |||||
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Sfida ✔️Rimozione paraffine; |
Soluzione
✔️Dissolutore di formalina (in attesa di brevetto); |
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Sfida
✔️Composizione del campione non standard |
Soluzione
✔️Lisi del campione mediante biglie con provette MN Bead tipo A |
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Per maggiori informazioni 
Working with RNA Do it right!